精子细胞氧化应激活性氧(ROS)细胞流式仪检测试剂盒产品说明书(中文版)
主要用途
精子细胞氧化应激活性氧(ROS)细胞流式仪检测试剂是一种旨在使用透膜荧光染色剂二氯荧光乙酰乙酸盐,在细胞氧化条件下,产生荧光,来定量检测精子细胞内活性氧族的生成和增加的*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于动物和人体精子细胞的活性氧族的检测。可以被用于细胞凋亡、衰老、代谢和营养学,以及发育生物学(男性不育)等的研究。产品严格无菌,即到即用,操作简便,性能稳定,荧光清晰。
技术背景
超氧自由基阴离子(superoxide radical;O2-)、过氧化氢(hydrogen peroxide;H2O2)、羟自由基或氢氧基(hydroxyl radical;OH-)、过氧化基(peroxyl radical;ROO-)、氢过氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxyl radical)、氮氧基(nitric Oxide;NO-)、过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite anion;ONOO-)次氯酸(hypochlorous acid;HOCl)、半醌自由基(semiquinone radical)、单线态氧气(singlet oxygen)等细胞内活性氧族(Reactive Oxygen Species;ROS)的产生和增多,甚而导致诸如男性不育、冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。2',7'-二氯荧光乙酰乙酸盐(2',7'-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)一种*自由通过细胞膜的染色剂。一旦被过氧化氢、过氧化基、过氧亚硝基阴离子等氧化,便产生荧光。据此测定精子细胞内活性氧族的浓度。
产品内容
高纯液(Reagent A) 毫升
低纯液(Reagent B) 毫升
保存液(Reagent C) 毫升
染色液A(Reagent D) 微升
染色液B(Reagent E) 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存 高纯液(Reagent A)和 低纯液(Reagent B)在4℃冰箱里,其余的保存在-20℃冰箱里; 染色液A和B(Reagent D和E)避免光照,有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管:用于样品操作的容器
2毫升离心管:用于样品操作的容器
15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器
细胞培养箱:用于样品孵育
微型台式离心机:用于样品操作
血细胞计数器:用于细胞计数
细胞流式仪:用于分析染色的精子细胞
实验步骤
激发波长 | 488nm | 488nm |
匹配荧光染料 | 异硫氰酸荧光素(FITC) | 藻红蛋白(phycoerythrin;PE) |
荧光颜色 | 绿色 | 红色 |
散发波长 | 530 | 575 |
流式仪通道 | FL1 | FL2 |
荧光增强 | ROS阳性细胞 | 无活力细胞 |
象限 | 结果 | 精子细胞百分率 |
左上象限 | 凋亡精子细胞 | 36% |
左下象限 | 有活力精子细胞 | 53.5% |
右上象限 | ROS阳性的凋亡精子细胞 | 7.3% |
右下象限 | ROS阳性的活力精子细胞 | 3.1% |
注意事项
1毫米方块的细胞计数X 104(稀释倍数)=实际细胞数/毫升
质量标准
电话
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