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体液总抗氧化能力比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)
点击次数:267 发布时间:2021-04-13

MB10114.4 v.A

 

 体液总抗氧化能力比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)

 

主要用途

 

 体液总抗氧化能力(TAC)比色法定量检测试剂是一种旨在通过过硫酸钾的参与,使染料ABTS氧化,在抗氧化剂的存在下,通过分光光度仪,观察其峰值下降的变化,来定量检测对应于标准水溶性生育酚Trolox总抗氧化能力,即抑制氧化等值浓度的*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种体液包括血浆、血清、尿液、脑脊液、唾液、精液等各种体液的总抗氧化能力检测。产品严格无菌,即到即用,操作简易,性能稳定。

 

技术背景

 

超氧自由基阴离子superoxide radicalO2-)、过氧化氢(hydrogen peroxideH2O2)、羟自由基或氢氧基hydroxyl radicalOH-)、过氧化基(peroxyl radicalROO-)、氢过氧自由基(hydroperoxylHOO)、烷氧自由基(alcoxyl radical)、氮氧基(nitric OxideNO-、过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite anionONOO-次氯酸(hypochlorous acidHOCl)、半醌自由基semiquinone radical)、单线态氧气(singlet oxygen)等细胞内活性氧族(Reactive Oxygen SpeciesROS)的产生和增多,将导致细胞衰老或凋亡,甚而导致诸如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。在生物系统内,通过抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等,大分子,例如白蛋白、铜蓝蛋白(ceruloplasminCER)、铁蛋白(ferritin)和抗氧化因子,例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素(bilirubin)等,产生抗氧化能力,即捕获自由基的能力,达到消除或降低ROS的损害。通过过硫酸钾potassium persulfate)氧化2,2’-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzthiazoline- 6-sulfonic acid)diammonium saltABTS产生的ABTS自由基,衡量体系中抗氧化剂捕获自由基或者消耗抗氧化剂的能力,在分光光度仪(730nm波长)的帮助下,观察其峰值下降的变化,并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照。

 

产品内容

 

 缓冲液(Reagent A      毫升

 染色液AReagent B1

 染色液BReagent B2 毫升

 氧化液(Reagent C      毫升

 标准液(Reagent D      微升

产品说明书 1

 

保存方式

 

保存在-20冰箱里,有效保证6

 

用户自备

 

1.5毫升离心管:用于样品存放和标准品配制的容器

4微型台式离心机:用于样品处理

96孔板:用于比色的容器

分光光度仪或酶标仪:用于比色变化

 

实验步骤

 

  • 样品准备

 

选择一:血浆样品

  • 准备好肝素或ACD抗凝管(注意:避免使用EDTA抗凝管
  • 抽取1毫升血液,置于抗凝管里
  • 放进4℃微型台式离心机离心10分钟,速度为700g(或3000RPM,例如eppendorf 5415
  • 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分(注意:避免触碰白色液体层
  • 即刻置于冰槽里备用或放进-70℃冰箱里保存
  • 移取10微升上述制备的血浆到新的1.5毫升离心管
  • 加入xx微升 缓冲液(Reagent A),混匀
  • 放在冰槽里待测

 

选择二:血清样品

1 准备好不含抗凝剂的储存管

  • 抽取1毫升血液,置于储存管里
  • 室温下,静置30分钟,直至血液凝结
  • 放进4℃微型台式离心机离心15分钟,速度为2000g(或5000RPM,例如eppendorf 5415
  • 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分(注意:避免触碰白色液体层
  • 即刻置于冰槽里备用或放进-70℃冰箱里保存
  • 移取10微升上述制备的血清到新的1.5毫升离心管
  • 加入xx微升 缓冲液(Reagent A),混匀
  • 放在冰槽里待测

 

选择三:尿液/脑脊液/唾液/精液样品 

  • 准备好1.5毫升离心管
  • 移取1毫升液体到离心管
  • 放进4℃微型台式离心机离心10分钟,速度为700g(或3000RPM,例如eppendorf 5415
  • 小心移取上清液到新的1.5毫升离心管
  • 即刻置于冰槽里备用或放进-70℃冰箱里保存
  • 移取10微升到新的1.5毫升离心管
  • 加入xx微升 缓冲液(Reagent A),混匀
  • 放在冰槽里待测

 

二、标准液准备

 

  • 准备好51.5毫升离心管,标记为15号管
  • 移取xx微升 标准液(Reagent D1号管
  • 小心移取xx微升 缓冲液(Reagent Axx微升 标准液(Reagent D2号管,混匀
  • 小心移取xx微升 缓冲液(Reagent Axx微升 标准液(Reagent D3号管,混匀
  • 小心移取xx微升 缓冲液(Reagent Axx微升 标准液(Reagent D4号管,混匀
  • 小心移取xx微升 缓冲液(Reagent A5号管
  • 15号管放进冰槽里备用,避免光照;标准管浓度见下表

 

管号

 缓冲液(Reagent A

 标准液(Reagent D

测定体系

标准 Trolox浓度

1

xx微升

xx微升

xx微摩尔/

2

xx微升

xx微升

xx微摩尔/

3

xx微升

xx微升

xx微摩尔/

4

xx微升

xx微升 

xx微摩尔/

5

xx微升

0

0

 

  • 样品测读

 

实验开始前,将-20冰箱里的试剂置于室温下融化,移取xx毫升 染色液BReagent B21 染色液AReagent B1里,混匀,置于暗室里室温下孵育过夜(16小时)后,标记为 染色工作液避免光照。然后进行下列操作。

 

  • 准备196孔板,做好标记:空白对照孔、标准对照孔、样品孔
  • 分别移取xx微升 缓冲液(Reagent A96孔板里的每个孔里
  • 分别加入xx微升 染色工作  
  • 分别加入xx微升 氧化液(Reagent C
  • 加入xx微升 缓冲液(Reagent A空白对照孔
  • 加入xx微升上述配制的 标准液(Reagent D到相应标准对照孔里
  • 加入10微升体液样品到样品孔里
  • 轻轻摇动96孔板,使其混匀
  • 室温下孵育1分钟
  • 即刻放进酶标仪里测读:730nm波长
  • 分析结果:
    • 构建标准曲线:纵座标(Y轴)为吸光单位(OD730nm);横座标(X轴)为标准Trolox浓度(微摩尔/升)
    • 空白对照孔为最大吸光单位(OD730nm)读数
    • 标准对照孔和样品孔为实际吸光单位(OD730nm)读数
    • 根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度(微摩尔/升)
    • 计算样品实际总抗氧化能力

 

 

  • 根据下列公式计算测定体系中样品量的总抗氧化能力(实际抑制百分率)

 

  • IC5050%抑制率所需的样品单位:TROLOX等值或样品蛋白浓度(毫克/毫升)或样品容量(微升)

 

 

 

注意事项

 

  • 本产品为50次操作
  • 本产品测试范围为高浓度30150微摩尔
  • 操作时,须戴手套
  • 体液制备的所有操作均须在4状态下进行
  • 测试前,样品须处于新鲜收集
  • 样品须清澈
  • 样品避免含有TrisEDTA和还原剂等
  • 空白对照孔的吸光读数应为2.0以上,如果低于1.5,不能用于高浓度检测,须增加 染色工作液的室温孵育时间
  •  染色工作液避免反复在室温空气中久置。如果空白对照孔的吸光读数为3.5以上,建议使用无离子水稀释到2.53.0则可
  • 样品读数越低,抗氧化能力越高
  • 样本量不宜超过20微升
  • 可以使用比色皿检测
  • 如果样品抗氧化剂浓度过高或过低, 建议稀释或增加样品浓度
  • 如果测试样品很多,建议使用排枪移液
  • 如果用户没有730nm波长滤波器,可以使用640nm810nm之间的任一波长替代;或者使用405nm波长替代
  • 人体体液的总抗氧化能力在0.22毫摩尔标准水溶性生育酚Trolox的浓度
  • 本公司提供低浓度测试试剂产品
  • 本公司提供系列抗氧化分析试剂产品

 

质量标准

 

  • 本产品经鉴定性能稳定
  • 本产品经鉴定检测敏感
电话
86-021-55825868
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