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大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞的冻存与复苏操作

发表时间:2022-02-21  |  点击率:128
 
  大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞使用10%DMSO冻存液冷冻,采用干冰保存运输,收到细胞后,如果不立即复苏,请将细胞放入液氮中保存待用。切勿置于室温下,以免造成DMSO损伤,避免反复冻融。
 
  大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(未分化)房冷冻保存方法一:冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽长期储存。
 
  冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,但存活率稍微降低一些。
 
  大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(未分化)复苏操作要点:
 
  1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(未分化)管,加入8mL预热培养基。
 
  2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
 
  3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(未分化)管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(未分化)管内。
 
  4)800rpm离大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(未分化)5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
 
  5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
 
  6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
 
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