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浅谈人凝血因子Ⅲelisa试剂盒的操作步骤

发表时间:2022-05-17  |  点击率:81
 
  人凝血因子Ⅲelisa试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人凝血因子Ⅲ(FⅢ)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人凝血因子Ⅲ(FⅢ)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
 
  人凝血因子Ⅲelisa试剂盒的操作步骤:
 
  1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
 
  2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
 
  3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
 
  4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
 
  5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
 
  6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
 
  7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
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