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小鼠抗IgE受体抗体elisa试剂盒要如何使用

发表时间:2022-05-06  |  点击率:232
 
  小鼠抗IgE受体抗体elisa试剂盒用抗小鼠IgE单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的IgE与单抗结合,加入酶标抗体,形成免疫复合物连接在板上,加入酶底物TMB,出现蓝色,加终止液硫酸,颜色变黄,在450nm处测OD值,IgE浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中IgE浓度。
 
  小鼠抗IgE受体抗体elisa试剂盒准备试剂与收集血样:
 
  1.收集标本:血清、血浆(肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,避免反复冻融。正常标本测定前用标本稀释液作1:10稀释(取20ul,加标本稀释液180ul,稀释10倍)。
 
  2.标准品液配制:使用前加入0.5ml蒸馏水混匀,配成2500ng/ml的溶液。设标准管8管,第一管加标本稀释液900ul,第二至第八管加入标本稀释液500ul。在第一管中加入2500ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。
 
  3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。
 
  4.洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)
 
  检测程序
 
  1.加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
 
  2.洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。。
 
  3.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃60分钟。
 
  4.洗板:同前。
 
  5.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗处反应15分钟。
 
  6.每孔加入100ul终止液混匀。
 
  7.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
 
  结果计算与判断
 
  1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。
 
  2.以标准品250、125、62.5、31.2、15.6、7.8、3.9、0ng/ml为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。
 
  3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应IgE含量,再乘上稀释倍数即可。
 
  试剂盒性能
 
  1.灵敏度:最小的IgE检测浓度小于2ng/ml。
 
  2.特异性:可同时检测重组或天然的小鼠IgE。不与小鼠其它细胞因子有交叉反应。
 
  3.重复性:板内、板见变异系数均小于12%。
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